单细胞蛋白质组学(single-cell proteomics)是指在单个细胞水平上对其蛋白质组进行定量和定性的分析技术,旨在研究单个细胞内蛋白质组成、变化及其翻译后修饰。单细胞蛋白质组学应用于多个领域,它能够揭示同种细胞之间的异质性,特别是在肿瘤研究中,帮助理解癌细胞的耐药性、进展及其分子机制。此外,单细胞蛋白质组学可用于研究细胞发育与分化过程中蛋白质表达的变化,从而深入探讨细胞命运决定的分子机制。在疾病研究方面,通过分析患者或疾病模型中单个细胞的蛋白质谱,揭示与疾病相关的关键分子机制,推动疾病的早期诊断与精准治疗。免疫学领域也受益于单细胞蛋白质组学,分析免疫细胞群体中的蛋白质谱,从而探索免疫应答过程中的分子标志物和功能。传统的蛋白质组学技术主要通过分析大规模样本中的蛋白质种类、表达水平和修饰等特征,提供关于细胞群体的总体信息,无法得到单个细胞的信息。在过去的十年中,单细胞RNA测序技术虽然在研究细胞异质性方面取得了显著进展,但由于转录和蛋白质的相关性较差,且RNA数据未能反映蛋白质的翻译后修饰,单细胞蛋白质组学则在揭示细胞内实际功能表达方面显示出了更大的潜力。
基于Thermo最先进的Orbitrap Astral高分辨质谱仪以及Bruker的timsTOF HT设备,百泰派克生物科技提供单细胞蛋白质组学分析服务。百泰派克生物科技通过采用全流程集成自动化的单细胞分选平台——CellenONE,搭建了尖端的单细胞蛋白质组学分析平台,能够在高度异质性的生物样本中,实现精确、稳定检测与分析,满足高灵敏度与高重复性的研究需求。
样本的质量是单细胞蛋白质组学实验成功的关键一步,百泰派克生物科技为您提供了详细的样本采集与寄送指南以确保每一步操作都符合严格的标准,从而保证实验数据的高质量。请参考以下单细胞蛋白组送样秘籍:
一、新鲜血液样本、培养细胞
1. 样本量 :全血样本使用EDTA抗凝管(紫色)收集,全血体积至少3mL;培养细胞置于培养基内,细胞量至少20万个。新鲜血液样本需要先分离得到关注的细胞(可再与业务员沟通),然后再放在保存液中保存。培养细胞离心去除培养液后,也放在培养液中保存(百泰派克提供)。保存条件:4℃或-20℃保存。
2. 运输方式:放在泡沫盒中,运输过程中避免剧烈震荡。春秋季常温运输;在冬季,温度极低(低于0℃) 的情况下,需要在样本管的外壁包裹棉花或纱布,用于保温;在夏季,温度高(高于25℃) 的情况下,泡沫盒中置2-4个生物冰袋并利用防震袋或泡沫等将冰袋与样本管隔开,保证样本到公司不会被冻住。
3. 运输时间:要求组织样本在72h内到公司。注:生物冰袋及棉花的是否添加及添加数量是天气情况而定,原则上是保持样本常温运输(保持在4-8℃),保证样本既不会太热也不会太冷被冻住。冰袋需是-20℃冻过的,一定不要用-80℃冻过的冰袋。
二、新鲜单细胞悬液或原生质体
1.细胞量:新鲜单细胞悬液或原生质体可置于各自的培养基内,细胞量至少20万个。 样本管用封口膜封严。
2.运输方式:将样本放入合适的泡沫盒中,样本盒放2-4个生物冰袋或适当体积的湿冰,将泡沫盒封好。运输过程中避免剧烈震荡。
3. 运输时间:样本需在2小时内到达公司。
三、新鲜动物组织样本
1. 提前与百泰派克业务员联系,获取组织保存液(5mL/样本)。
2. 切取约200mg的组织(黄豆粒大小)。取样时注意事项:尽量避免取到坏死、钙化、硬化、纤维化的部位;如手术为电刀切割组织,去除因与电刀接触的坏死组织;确保目标组织术时无冰冻。确保新鲜组织没有真菌、细菌、支原体等的污染。
3. 将获得的组织立即快速用PBS或生理盐水洗掉组织表面的血液,消化系统组织需多次冲洗。
4. 将洗后的组织样本尽快放入加满组织保存液(百泰派克提供)的5mL离心管中,将离心管用封口膜密封好,管壁外围添加填充介质,放入合适的泡沫盒中。
5. 若室外温度较高,如夏季,可向泡沫盒中加适量生物冰袋;若室外温度极低,如冬季,需在管子外壁添加棉花、纱布等保温物质,将离心管置于泡沫盒中。
6. 联系快递公司邮寄。邮寄前请提前联系公司工作人员并随时跟踪货物进展情况,以免样本到达公司无人处理。要求组织样本在72h内到公司。
注:生物冰袋及棉花的是否添加及添加数量是天气情况而定,原则上是保持样本常温运输,保证样本既不会太热也不会太冷被冻住。冰袋需是-20℃冻过的,一定不要用-80℃ 冻过的冰袋。
四、冻存细胞(细胞到公司后复苏)
1. 细胞量:冻存细胞一般为冻存的PBMC、冻存的组织消化的原代细胞悬液,细胞量至少需要20万个。
2. 准备流程:
(1)准备通用细胞冻存液,并将细胞冻存液完全融解并混匀。
(2)将需要冻存的细胞通过细胞计数仪计算出细胞总数。细胞的冻存密度一般为1×106个/ml。
(3)将细胞离心,弃上清,保留细胞沉淀。不同细胞类型的离心条件有差异。例如人PBMC细胞的离心条件是300g,5分钟。
(4)根据细胞数量计算需加入的细胞冻存液体积,用移液枪吸取细胞冻存液并轻轻吹打重悬细胞。
(5)根据体积将上述细胞分装至细胞冻存管中,并进行标记。注意:须使用专门用于液氮冻存的细胞冻存管,不可使用普通的离心管。
(6)将细胞冻存管放置于可逐步降低温度的装置,如程序性冻存盒内,再放入-80℃冰箱,确保温度下降速度约为1℃/min,24小时后可进行运输。
3. 运输方式:干冰运输。在邮寄前将冻存的样本从冻存环境中取出并做好包装,放入壁厚且质量完好的泡沫盒中,样本的上下和四周都用干冰填满,将泡沫盒子封好后邮寄。
4. 运输时间及干冰量:24小时内能够到达的,干冰重量不得低于5kg;48小时内能够到达的,干冰重量不得低于10kg;72小时内能够到达的,干冰重量不得低于15kg。
5. 联系快递公司邮寄。邮寄前请提前联系公司工作人员并随时跟踪货物进展情况,以免样本到达公司无人处理。
五、冻存组织(组织到公司后复苏消化)
1. 提前与百泰派克业务员联系,获取组织冻存液(5mL/样本)。
2. 取约500mg的组织(约3个黄豆粒大小)。
取样时注意事项:尽量避免取到坏死、钙化、硬化、纤维化的部位;如手术为电刀切割组织,去除因与电刀接触的坏死组织;确保目标组织术时无冰冻。确保新鲜组织没有真菌、细菌、支原体等的污染。
3. 将获得的组织立即快速用PBS或生理盐水洗掉组织表面的血液,消化系统组织需多次冲洗。
4. 将清洗后的组织剪碎,转移至加有百泰派克组织冻存液(百泰派克提供)的细胞冻存管中。注意:加入的冻存液体积视样本量多少而定,建议样本体积与组织冻存液 体积比例为1:10,例如100mg组织样本对应加入约1ml组织冻存液。使用细胞冻存管,不可使用普通的离心管。
5. 将细胞冻存管放置于可逐步降低温度的装置,如程序性冻存盒内,再放入-80℃冰箱,确保温度下降速度约为1℃/min,24 小时后可进行运输。
6. 运输方式:干冰运输。适用的样本管为细胞液氮冻存管。在邮寄前将冻存的样本从冻存环境中取出并做好包装,放入壁厚且质量完好的泡沫盒中,样本的上下和四周都用干冰填满,将泡沫盒子封好后邮寄。
7. 运输时间及干冰量:24小时内能够到达的,干冰重量不得低于5kg;48小时内能够到达的,干冰重量不得低于10kg;72小时内能够到达的,干冰重量不得低于15kg。
8. 联系快递公司邮寄。邮寄前请提前联系公司工作人员并随时跟踪货物进展情况,以免样本到达公司无人处理。
六、新鲜的植物组织样本
1. 组织质量要要求:500mg以上。
2. 将组织置于原来的生长环境(培养基或土培等)或切取目标组织样本,包装后放入合适的泡沫盒中。
3. 若室外温度较高,如夏季,可向泡沫盒中加适量生物冰袋;若室外温度极低,如冬季,需在管子外壁添加棉花、纱布等保温物质,将离心管置于泡沫盒中。
4. 联系快递公司邮寄。邮寄前请提前联系公司工作人员并随时跟踪货物进展情况,以免样本到达公司无人处理。要求组织样本在48h内到公司。
注:生物冰袋及棉花的是否添加及添加数量是天气情况而定,原则上是保持样本常温运输,保证样本既不会因为太热腐烂也不会因为太冷被冻伤。冰袋需是-20°C冻过的,一定不要用-80°C冻过的冰袋。
凭借专业的技术团队和7大质量控制检测平台,百泰派克生物科技致力于为研究人员提供先进的单细胞蛋白质组学分析服务。百泰派克生物科技(BTP)采用ISO9001认证质量控制体系管理实验室,获国家CNAS实验室认可,在蛋白质组学领域拥有多年服务经验,竭诚为您服务。我们期待与更多科研伙伴展开合作,共同推动这一前沿领域的发展,探索生命科学中的更多未知。
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